Hologic Progensa PCA3 Assay Kasutusjuhend

Bränd: Hologic

Mudel: Progensa PCA3 Assay

Tüüp: Kasutusjuhend

Progensa PCA3

Progensa PCA3-määritys

Progensa PCA3 -määritys 1

501377FI Rev. 003

In vitro -diagnostiseen käyttöön.

Ainoastaan vientiin Yhdysvalloista.

Yleistietoja . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

Aiottu käyttö . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

Testin yhteenveto ja kuvaus . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

Toimenpiteen periaatteet . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

Toimitetut reagenssit ja materiaalit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4

Materiaalit . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8

Varoitukset ja varotoimet . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 10

Säilytys- ja käsittelyohjeet . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12

Näytteen kerääminen, kuljetus ja säilytys . . . . . . . . . . . . . . . . . 14

Testimenetelmä . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 16

Toimenpiteeseen liittyviä huomautuksia . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22

Laadunvalvonta . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25

Tulosten tulkinta . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26

Rajoitukset . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31

Suorituskyvyn ominaisuudet . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32

Kirjallisuusluettelo . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38

Progensa PCA3 -määritys 2

501377FI Rev. 003

Yleistietoja Progensa PCA3

Yleistietoja

Aiottu käyttö

Progensa PCA3 -määritys on in vitro -nukleiinihappomonistustesti (NAAT), jolla miesten

virtsanäytteistä todetaan eturauhassyöpägeeni 3:n (PCA3) ribonukleiinihappo (RNA) ja

saadaan PCA3 Score (PCA3-arvo). PCA3 Score on tarkoitettu käytettäväksi yhdessä

tavanomaisten hoitoa koskevien algoritmien kanssa apuna eturauhassyövän diagnoosissa.

Testin yhteenveto ja kuvaus

Eturauhassyövän seulonnassa käytetty seerumin prostataspesifisen antigeenin (PSA) testaus

on johtanut entistä pienempien, aikaisemmin huomaamatta jääneiden kasvaimien

biopsiadiagnooseihin (1) ja näin ollen saanut aikaan uuden diagnostisen ongelman: vain

osalla miehistä, joilla on kohonneet seerumin PSA-arvot, on havaittavissa oleva

eturauhassyöpä. Miehillä, joilla on ainakin yksi negatiivinen biopsia, on usein jatkuvasti

koholla oleva seerumin PSA, mikä johtuu etusijassa laajenneesta eturauhasesta ja prostatan

hyvänlaatuisesta liikakasvusta (BPH). Silti merkittävällä osalla miehistä, joilla seerumin PSA

on hieman koholla (2,5–4,0 µg/l), joko on tai sille kehittyy kliinisesti merkitsevä

eturauhassyöpä (1). Vaikka biopsia on edelleen kultainen standardi eturauhassyövän

havaitsemisessa, tarvitaan tarkempia, spesifisempiä testejä auttamaan eturauhasen biopsiaa

koskevaa päätöksentekoa.

PCA3 (tunnetaan myös nimellä ”PCA3DD3 ” tai ”DD3PCA3”) on ei-koodittava prostataspesifinen

RNA, jonka ilmentyminen eturauhassyöpäsoluissa viereiseen hyvänlaatuiseen kudokseen

verrattuna on rajusti runsastunut ylisäätelyn mediaanin ollessa 66-kertainen (2). Sitä vastoin

PSA-geenin ilmentyminen on samanlainen kanserooseissa ja hyvänlaatuisissa

eturauhassoluissa; PSA-RNA:n määriä voidaan näin ollen käyttää normalisoimaan

molekulaaristen testinäytteiden prostataspesifisen ribonukleiinihapon (RNA) määrät. On

osoitettu, että kvantitatiivinen PCA3-pohjainen molekulaarinen testaus virtsan sakoista (2) ja

kokovirtsasta (3) on käyttökelpoinen.

Progensa PCA3 -määrityksessä käytetään kokovirtsaa, joka kerätään peräsuolen kautta

tehtävän tuseerauksen (TPR) jälkeen, jossa kumpaakin eturauhaslohkoa sivellään kolme

kertaa. TPR vapauttaa eturauhasen soluja eturauhasen tiehytjärjestelmän kautta

virtsaputkeen, josta ne voidaan kerätä ensivirtsaan. Virtsa prosessoidaan lisäämällä virtsan

siirtoliuosta (UTM), joka hajottaa solut ja stabiloi RNA:n. PCA3:n ja PSA:n RNA:t

kvantifioidaan ja PCA3 Scoren määritys perustuu PCA3:n ja PSA:n RNA-suhteeseen. PCA3-

signaalin normalisoinnin lisäksi PSA-RNA:n mittaaminen auttaa myös varmistamaan, että

eturauhasspesifisen RNA:n saanto on riittävä validin tuloksen aikaansaamiseksi.

Korkeammat PCA3 Scoret korreloivat positiivisen eturauhasbiopsian korkeamman

todennäköisyyden kanssa.

Toimenpiteen periaatteet

Progensa PCA3 -määritys muodostuu kahdesta kvantitatiivisesta

nukleiinihappomonistustestistä. Progensa PCA3 -määritys yhdistää kohteen sieppauksen

(target capture), transkriptiovälitteisen monistuksen (TMA) ja hybridisaatiosuojelumäärityksen

(HPA), jolloin vastaavasti virtsanäytteen prosessointi, kohde-RNA:n monistus ja amplikonin

havaitseminen virtaviivaistetaan.

Progensa PCA3 Yleistietoja

Progensa PCA3 -määritys 3

501377FI Rev. 003

Kun Progensa PCA3 -määritys suoritetaan laboratoriossa, kohde-RNA-molekyylit eristetään

virtsanäytteistä target capture -menetelmällä. Oligonukleotidit (”sieppausoligonukleotidit”),

jotka ovat komplementaarisia kohteiden sekvenssispesifisten alueiden kanssa, hybridisoidaan

virtsanäytteessä oleviin kohteisiin. Jokaista kohdetta varten käytetään erillistä

sieppausoligonukleotidia. Hybridisoitunut kohde siepataan sitten magneettisten

mikropartikkeleiden pinnalle, jotka erotetaan virtsanäytteestä magneettikentässä.

Pesuvaiheiden avulla reaktioputkesta poistetaan ylimääräiset komponentit. Magneettinen

erottaminen ja pesuvaiheet suoritetaan target capture -järjestelmällä.

Kohteen monistuminen tapahtuu TMA:n välityksellä, joka on transkriptiopohjainen

nukleiinihappomonistusmenetelmä, jossa käytetään kahta entsyymiä, Moloneyn

hiirileukemiaviruksen (MMLV) käänteistranskriptaasia ja T7 RNA-polymeraasia. Jokaista

kohdetta varten käytetään ainutkertaista oligosettiä. Käänteistranskriptaasia käytetään

tuottamaan kohdesekvenssin deoksiribonukleiinihappo (DNA) -kopio (joka sisältää T7 RNA-

polymeraasin promoottorisekvenssin). T7 RNA-polymeraasi tuottaa useita kopioita RNA-

amplikonista DNA:n kopiotemplaatista.

Havaitseminen saadaan aikaan HPA:lla käyttämällä yksijuosteisia, kemiluminesenssilla

leimattuja nukleiinihappokoettimia, jotka ovat komplementaarisia amplikonille. Kutakin

kohdeamplikonia varten käytetään eri koettimia. Leimatut nukleiinihappokoettimet

hybridisoituvat erityisesti amplikoniin. Erotusreagenssi erottaa hybridisoidut ja

hybridisoitumattomat koettimet toisistaan inaktivoimalla hybridisoitumattomien koettimien

leiman. Havaitsemisvaiheen aikana hybridisoituneen koettimen tuottama

kemiluminesenssisignaali mitataan luminometrissä ja se raportoidaan suhteellisina

valoyksikköinä (RLU).

PCA3- ja PSA-RNA:t kvantifioidaan eri putkista ja PCA3 Score määritetään. Jokaiseen

määritysajoon sisällytetään kalibraattoreita, jotka sisältävät tunnettuja määriä PCA3- tai PSA-

RNA-transkriptiotuotteita, ja niistä muodostetaan standardikäyrä. PCA3- ja PSA-kontrollit

sisällytetään myös mukaan, jotta standardikäyrästä interpoloitujen tulosten ulkoinen tarkkuus

voidaan varmistaa.

Progensa PCA3 -määritys 4

501377FI Rev. 003

Toimitetut reagenssit ja materiaalit Progensa PCA3

Toimitetut reagenssit ja materiaalit

Huomautus: Katso tietoja reagensseihin mahdollisesti liittyvistä vaaroista ja

varoituslausekkeista kohdasta Safety Data Sheet Library (turvallisuustiedotekirjasto)

osoitteessa www.hologic.com/sds.

Alla luetellaan reagenssit ja materiaalit, jotka sisältyvät Progensa PCA3/PSA-

määritystarvikesarjaan Progensa PCA3 -määritystä varten. Reagenssin tunnistussymbolit on

myös lueteltu reagenssin nimen vieressä.

Progensa PCA3 -määritystarvikesarja, 2 x 100 reaktiota, luettelonumero 302355

(8 laatikkoa)

Progensa PCA3 100-reaktiotarvikesarja

Progensa PCA3 -kylmälaatikko — Säilytetään vastaanottamisen jälkeen 2 °C–8 °C:ssa aina

etiketissä ilmoitettuun viimeiseen käyttöpäivään saakka

Progensa PCA3 -määrityksen huoneenlämmössä pidettävä laatikko — Säilytetään

vastaanottamisen jälkeen 15 °C–30 °C:ssa aina etiketissä ilmoitettuun viimeiseen

käyttöpäivään saakka

Symboli Osa Määrä

A PCA3-monistusreagenssi

Ei-infektiivisiä nukleiinihappoja, jotka on kuivattu HEPES-

puskuroidussa liuoksessa, joka sisältää <10 % täyteainetta.

1 ampulli

E PCA3/PSA-entsyymireagenssi

Käänteistranskriptaasi ja RNA-polymeraasi, kuivattu HEPES-

puskuroidussa liuoksessa, joka sisältää <10 % täyteainetta.

1 ampulli

P PCA3-koetinreagenssi

Ei-infektiivisiä kemiluminesoivia DNA-koettimia, jotka on kuivattu

sukkinaatilla puskuroidussa liuoksessa, joka sisältää <5 % täyteainetta

ja <5 % litiumlauryylisulfaattia.

1 ampulli

Symboli Osa Määrä

AR Liuos PCA3-monistusreagenssin liuotukseen

Säilöntäaineita sisältävä vesipohjainen liuos (<1 % parabeeneja).

1 x 9,3 ml

ER Liuos PCA3/PSA-entsyymireagenssin liuotukseen

HEPES-puskuroitu liuos, joka sisältää surfaktanttia (10 % Triton

X-100:aa) ja 20 % glyserolia.

1 x 3,3 ml

PR Liuos PCA3/PSA-koettimen liuotukseen

Sukkinaatilla puskuroitu liuos, joka sisältää <5 %

litiumlauryylisulfaattia.

1 x 12,4 ml

S PCA3/PSA-erotusreagenssi

Boraatilla puskuroitu liuos, joka sisältää surfaktanttia (1 % Triton

X-100).

1 x 31 ml

Progensa PCA3 Toimitetut reagenssit ja materiaalit

Progensa PCA3 -määritys 5

501377FI Rev. 003

Progensa PCA3 -kalibraattorien ja -kontrollien tarvikesarja — Säilytetään vastaanottamisen

jälkeen 2 °C–8 °C:ssa etiketissä ilmoitettuun viimeiseen käyttöpäivään saakka

Progensa PSA 100-reaktiotarvikesarja

Progensa PSA -kylmälaatikko — Säilytetään vastaanottamisen jälkeen 2 °C–8 °C:ssa

etiketissä ilmoitettuun viimeiseen käyttöpäivään saakka

TCR PCA3 Target Capture -reagenssi

Ei-infektiivinen nukleiinihappo HEPES-puskuroidussa liuoksessa, joka

sisältää kiinteän faasin.

1 x 22 ml

Suljentakortit 1 pakkaus

Liuotukseen käytettävät pidikkeet 1 pakkaus

Symboli Osa Määrä

CAL PCA3-kalibraattori 1

Fosfaatilla puskuroitu liuos, joka sisältää <5 % litiumlauryylisulfaattia.

1 x 2,0 ml

CAL PCA3-kalibraattorit 2–5

Ei-infektiivinen PCA3-nukleiinihappo fosfaattipuskuroidussa

liuoksessa, joka sisältää <5 % litiumlauryylisulfaattia.

4 x 1,7 ml

PC PCA3-positiiviset kontrollit

Ei-infektiivinen PCA3-nukleiinihappo fosfaattipuskuroidussa

liuoksessa, joka sisältää <5 % litiumlauryylisulfaattia.

2 x 1,7 ml

PCA3-pitoisuuden tietoarkki 1 arkki

Symboli Osa Määrä

A PSA-monistusreagenssi

Ei-infektiivisiä nukleiinihappoja, jotka on kuivattu HEPES-

puskuroidussa liuoksessa, joka sisältää <10 % täyteainetta.

1 ampulli

E PCA3/PSA-entsyymireagenssi

Käänteistranskriptaasi ja RNA-polymeraasi, kuivattu HEPES-

puskuroidussa liuoksessa, joka sisältää <10 % täyteainetta.

1 ampulli

P PSA-koetinreagenssi

Ei-infektiivisiä kemiluminesoivia DNA-koettimia, jotka on kuivattu

sukkinaatilla puskuroidussa liuoksessa, joka sisältää <5 % täyteainetta

ja <5 % litiumlauryylisulfaattia.

1 ampulli

Progensa PCA3 -määritys 6

501377FI Rev. 003

Toimitetut reagenssit ja materiaalit Progensa PCA3

Progensa PSA:n huoneenlämmössä pidettävä laatikko — Säilytetään vastaanottamisen

jälkeen 15 °C–30 °C:ssa aina etiketissä ilmoitettuun viimeiseen käyttöpäivään saakka

Progensa PSA-kalibraattorien ja -kontrollien tarvikesarja — Säilytetään vastaanottamisen

jälkeen 2 °C–8 °C:ssa aina etiketissä ilmoitettuun viimeiseen käyttöpäivään saakka

Symboli Osa Määrä

AR Liuos PSA-monistusreagenssin liuotukseen

Säilöntäaineita sisältävä vesipohjainen liuos (<1 % parabeeneja).

1 x 9,3 ml

ER Liuos PCA3/PSA-entsyymireagenssin liuotukseen

HEPES-puskuroitu liuos, joka sisältää surfaktanttia (10 % Triton

X-100:aa) ja 20 % glyserolia.

1 x 3,3 ml

PR Liuos PCA3/PSA-koettimen liuotukseen

Sukkinaatilla puskuroitu liuos, joka sisältää <5 % litiumlauryylisulfaattia.

1 x 12,4 ml

S PCA3/PSA-erotusreagenssi

Boraatilla puskuroitu liuos, joka sisältää surfaktanttia (1 % Triton X-100).

1 x 31 ml

TCR PSA Target Capture -reagenssi

Ei-infektiivinen nukleiinihappo HEPES-puskuroidussa liuoksessa, joka

sisältää kiinteän faasin.

1 x 22 ml

Suljentakortit 1 pakkaus

Liuotukseen käytettävät pidikkeet 1 pakkaus

Symboli Osa Määrä

CAL PSA-kalibraattori 1

Fosfaatilla puskuroitu liuos, joka sisältää <5 % litiumlauryylisulfaattia.

1 x 2,0 ml

CAL PSA-kalibraattorit 2–5

Ei-infektiivinen PSA-nukleiinihappo fosfaattipuskuroidussa liuoksessa,

joka sisältää <5 % litiumlauryylisulfaattia.

4 x 1,7 ml

PC PSA-positiiviset kontrollit

Ei-infektiivinen PSA-nukleiinihappo fosfaattipuskuroidussa liuoksessa,

joka sisältää <5 % litiumlauryylisulfaattia.

2 x 1,7 ml

PSA-pitoisuuden tietoarkki 1 arkki

Progensa PCA3 Toimitetut reagenssit ja materiaalit

Progensa PCA3 -määritys 7

501377FI Rev. 003

Aptima-määritysnesteet — Säilytetään vastaanottamisen jälkeen 15 °C–30 °C:ssa

(2 laatikkoa) etiketissä ilmoitettuun viimeiseen käyttöpäivään saakka

Huomautus: Kaikki Progensa PCA3 -määritystarvikesarjaan sisältyvät materiaalit voidaan

ostaa myös erikseen (katso yksityiskohtia osasta Materiaalit).

Symboli Osa Määrä

W Pesuliuos

HEPES-puskuroitu liuos, joka sisältää <2 % natriumdodekyylisulfaattia.

1 x 402 ml

DF Deaktivointiliuoksen puskuri

Bikarbonaatilla puskuroitu liuos.

1 x 402 ml

O Öljyreagenssi

Silikoniöljy.

1 x 24,6 ml

Progensa PCA3 -määritys 8

501377FI Rev. 003

Materiaalit Progensa PCA3

Materiaalit

Huomautus: Katso tietoja reagensseihin mahdollisesti liittyvistä vaaroista ja

varoituslausekkeista kohdasta Safety Data Sheet Library (turvallisuustiedotekirjasto)

osoitteessa www.hologic.com/sds.

Huomautus: Luetteloon on merkitty Hologic saatavien materiaalien luettelonumerot.

Tarvittavat materiaalit, jotka ovat saatavilla erikseen

Valinnanvaraiset materiaalit

Luettelo nro

Progensa PCA3 Urine Specimen Transport -tarvikesarja 302352

Leader HC+ -luminometri 104747

Hologic Target Capture (TCS) -järjestelmä 104555

Aptima Auto Detect -tarvikesarja 301048

2 eppendorf Repeater Plus -pipettoria 105725

Toistopipettorin kärkiä (2,5 ml, 5,0 ml, 25,0 ml) —

Joko:

2 vortex-sekoitinta moniputkiyksiköllä 102160F

3 kiertovesihaudetta 104586F

(62 °C ± 1 °C, 42 °C ± 1 °C, 62 °C ± 1 °C)

3 vesihaudevälikettä 104627

TAI:

2 SB100 Dry Heat Bath/Vortexer -laitetta 105524F

(yhd. lämpöhaude ja vortex-sekoitin)

Muiden SB100-laitteiden tarve riippuu vaadittavasta

suoritustehosta

—

Mikropipettori, 1 000 µl RAININ PR1000 901715

Kärkiä, 1 000 µl P1000 105049

Pipettori, eppendorf 20–200 µl 105726

Pipetinkärkiä, 20–200 µl —

5–7-prosenttinen (0,7–1,0 M) natriumhypokloriittiliuos —

Isolla korkilla varustettu muovisäiliö —

Tavanomaisia virtsankeruusäiliöitä, ilman säilöntäaineita —

Kymmenen putken yksiköitä (TTU) TU0022

Kymmenen kärjen kasetteja (TTC) 104578

SysCheck-kalibrointistandardi 301078

Luettelo nro

Progensa PCA3 100-reaktiotarvikesarja 302354

Progensa PSA 100-reaktiotarvikesarja 302357

Progensa PCA3 -kalibraattorien ja -kontrollien tarvikesarja 302353

Progensa PCA3 Materiaalit

Progensa PCA3 -määritys 9

501377FI Rev. 003

Progensa PSA -kalibraattorien ja -kontrollien tarvikesarja 302356

Progensa PCA3/PSA Proficiency Panels (taitopaneelit) 302350

Progensa PCA3 -näytteenlaimennustarvikesarja 302351

Aptima-määrityksen nestetarvikesarja 302002C

Kertakäyttöisiä pipetinkärkiä, suodattimella varustettuja, (1 ml) 10612513 (Tecan)

TECAN Freedom EVO 100/4 900932

PCA3-kansilevy-yksikkö, DTS 800 902021

Reagenssisäiliö (40 ml:n neljännesmoduuli) 104765

Jaettu reagenssisäiliö (19 ml x 2 neljännesmoduulia) 901172

—

Siirtoputket 302521

Puhkaistavien korkkien vaihtokorkit 302520

Ei-puhkaistavien korkkien vaihtokorkit 103036A

Luettelo nro

Progensa PCA3 -määritys 10

501377FI Rev. 003

Varoitukset ja varotoimet Progensa PCA3

Varoitukset ja varotoimet

A. In vitro -diagnostiseen käyttöön.

B. Ainoastaan vientiin Yhdysvalloista.

Laboratorioon liittyvää

C. Käytä ainoastaan toimitettuja tai määriteltyjä kertakäyttöisiä laboratoriovälineitä.

D. Käytä tavanomaisia laboratoriovarotoimia. Työskentelyyn varatuilla alueilla ei saa syödä,

juoda eikä tupakoida. Näytteitä ja tarvikesarjan reagensseja käsiteltäessä käytetään

talkittomia kertakäyttökäsineitä, silmänsuojainta ja laboratoriotakkia. Virtsanäytteiden ja

tarvikesarjan reagenssien käsittelyn jälkeen kädet pestään huolellisesti.

E. Varoitus: Ärsyttäviä aineita, syövyttäviä aineita. Vältä kosketusta Auto Detect 1:n tai

Auto Detect 2:n ja ihon, silmien tai limakalvojen välillä. Jos nämä nesteet joutuvat

kosketuksiin ihon tai silmien kanssa, pese kosketusalue vedellä. Jos näitä nesteitä

roiskuu, laimenna roiskeet vedellä ennen niiden pyyhkimistä.

F. Työtasot, pipettorit ja muut välineet on puhdistettava säännöllisesti 2,5–3,5 -prosenttisella

(0,35–0,5 M) natriumhypokloriittiliuoksella (ks. Toimenpiteeseen liittyviä huomautuksia).

G. Suosittelemme painokkaasti, että monistuksen jälkeiset työvaiheet suoritetaan erillisellä

alueella. Tämä minimoi amplikonikontaminaation määrityksessä. Tämän tälle vaiheelle

omistetun alueen on oltava etäällä monistusta edeltävästä alueesta, jossa reagenssin

valmistus, target capture -vaihe ja monistus tapahtuvat.

H. Jotta laboratorion tiloja estettäisiin kontaminoitumasta amplikonilla, laboratorioalue on

järjestettävä niin, että työnkulku on yksisuuntainen reagenssin valmistuksesta aina

monistuksen jälkeisiin työvaiheisiin asti. Näytteitä, laitteita ja reagensseja ei saa palauttaa

alueelle, jossa aikaisempi vaihe suoritettiin. Henkilöt eivät saa siirtyä takaisin

aikaisemmille työalueille ilman asianmukaisia kontaminaation vastaisia varotoimia.

Näytteisiin liittyvää

I. Kun virtsa on lisätty, nestetason virtsanäytteen siirtoputkessa on oltava putken etiketissä

näkyvien kahden mustan indikaattoriviivan välillä. Muuten näyte on hylättävä.

J. Pidä yllä oikeita säilytysolosuhteita näytteen kuljetuksen aikana varmistaaksesi näytteen

integriteetin. Näytteen stabiliteettia muissa kuin suositelluissa kuljetusolosuhteissa ei ole

arvioitu.

K. Viimeiset käyttöpäivät, jotka on lueteltu keräämiseen tarkoitetuissa tarvikesarjoissa,

koskevat keruupaikkaa, eivät testauslaitosta. Näytteet, jotka on kerätty ennen

keräämiseen tarkoitetun tarvikesarjan viimeistä käyttöpäivää, ja kuljetettu ja säilytetty

pakkausselosteen mukaisesti, ovat valideja testausta varten, vaikka keruuputken

viimeinen käyttöpäivä olisikin mennyt.

L. Säilytä kaikkia näytteitä erikseen mainituissa lämpötiloissa. Väärin säilytettyjen näytteiden

käyttö saattaa haitata määrityksen suorittamista. Yksityiskohtaiset ohjeet, ks. Näytteen

kerääminen, kuljetus ja säilytys.

Progensa PCA3 Varoitukset ja varotoimet

Progensa PCA3 -määritys 11

501377FI Rev. 003

M. Virtsanäytteet voivat olla infektiivisiä. Käytä yleisiä varotoimia tätä määritystä

suoritettaessa. Laboratorion johtajan on luotava oikeat käsittely- ja hävitysmenetelmät.

Tämän menetelmän saa suorittaa vain henkilökunta, joka on riittävän pätevä Progensa

PCA3 -määrityksen käytössä ja joka on saanut riittävän koulutuksen infektiivisten

materiaalien käsittelyssä.

N. Vältä ristikontaminaatiota näytteen käsittelyvaiheiden aikana. Virtsanäytteet voivat sisältää

suuria määriä kohde-RNA:ta. Varmista, että näytesäiliöt eivät kosketa toisiaan, ja hävitä

käytetyt materiaalit viemättä niitä avoimien säiliöiden yli. Jos käsineet koskettavat

näytettä, vaihda ne ristikontaminaation välttämiseksi.

Määritykseen liittyvää

O. Älä käytä tätä tarvikesarjaa sen viimeisen käyttöpäivän jälkeen.

P. Kun käytetään Progensa PCA3 -määritystarvikesarjaa, älä vaihda keskenään,

sekoita tai yhdistä PCA3-määritysreagensseja, joilla on eri eränumerot (so. jokaisen

analyytin kohdalla kylmälaatikossa ja huoneenlämmössä pidettävässä laatikossa olevien

määritysreagenssien on oltava peräisin samasta erästä). Määritysreagensseja voidaan

käyttää eri eristä peräisin olevien kalibraattori ja kontrollit -tarvikesarjojen kanssa. Aptima-

määritysnestetarvikesarjat ovat keskenään vaihtokelpoisia. PCA3- ja PSA-

reagenssitarvikesarjojen ei tarvitse vastata toisiaan.

Q. Säilytä kaikkia määrityksen reagensseja erikseen mainituissa lämpötiloissa. Väärin

säilytettyjen määritysreagenssien käyttö saattaa haitata määrityksen suorittamista.

Yksityiskohtaiset ohjeet, ks. Säilytys- ja käsittelyohjeet ja Toimenpiteeseen liittyviä

huomautuksia.

R. Määrityksen deaktivaatiota varten (katso Testimenetelmä) natriumkloriittiliuoksen

vähimmäispitoisuuden on oltava 2,5 % (0,35 M) natriumkloriittia sen jälkeen kun se on

laimennettu deaktivaatiopuskurilla suhteessa 1:1. Niinpä lähtöliuoksen

natriumhypokloriittipitoisuuden on oltava ainakin 5–7 % (0,7–1,0 M) natriumkloriittia, jotta

saataisiin deaktivaatioon tarvittava loppupitoisuus.

S. On käytettävä kärkiä, joissa on hydrofobiset filtterit. Tähän määritykseen on varattava

vähintään kaksi toistopipettoria: toista käytetään monistusta edeltävissä vaiheissa ja toista

monistuksen jälkeisissä vaiheissa. Yhtä mikropipettoria on käytettävä yksinomaan

näytteen siirtoon, ellei käytetä TECAN Freedom EVO 100/4 -laitetta. Kaikki pipettorit on

puhdistettava säännöllisesti osassa kuvatulla tavalla Toimenpiteeseen liittyviä

huomautuksia.

T. Kun käytät toistopipettoreita reagenssien lisäämiseen, älä kosketa reaktioputkea

pipettorin kärjellä. Näin estät jäänteen siirtymisen yhdestä putkesta toiseen.

U. Tarkkojen määritystuloksien saamiseksi on välttämätöntä suorittaa riittävä sekoitus. Loput

yksityiskohdat, ks. Toimenpiteeseen liittyviä huomautuksia.

V. Määritykselle on omistettava erilliset vesihauteet määrityksen monistusta edeltäviä,

monistuksen aikaisia ja monistuksen jälkeisiä vaiheita varten.

W. Jotkin tämän tarvikesarjan reagenssit on merkitty vaara- ja turvamerkeillä Euroopan

unionin direktiivin 1999/45/EY mukaisesti ja niitä on käsiteltävä vastaavasti.

Käyttöturvallisuustiedotteita voi tarkastella osoitteessa www.hologic.com ja ne ovat

saatavilla pyydettäessä.

Progensa PCA3 -määritys 12

501377FI Rev. 003

Säilytys- ja käsittelyohjeet Progensa PCA3

Säilytys- ja käsittelyohjeet

A. Reagenssien säilytystiedot, ks. Taulukko 1.

B. Älä säilytä Target Capture -reagenssia alle 15 °C :n lämpötiloissa.

C. Koetinreagenssi ja liuotettu koetinreagenssi ovat valoherkkiä. Suojaa näitä reagensseja

pitkiltä valoaltistuksilta säilytyksen ja käyttöön valmistelun aikana.

D. Reagensseja ei saa jäädyttää.

E. Älä käytä reagensseja tai nesteitä viimeisen käyttöpäivän jälkeen.

F. Progensa PCA3- ja PSA-kalibraattorit ja -kontrollit ovat kertakäyttöisiä pulloja ja ne on

hävitettävä käytön jälkeen.

G. Muutokset toimitetun reagenssin fyysisessä ulkonäössä voivat olla merkki näiden

materiaalien epästabiiliudesta tai huononemisesta. Jos suspendoinnin jälkeen havaitaan

muutoksia reagenssien fyysisessä ulkonäössä (esim. ilmeisiä muutoksia reagenssin

värissä tai sameus, joka viittaa mikrobikontaminaatioon), ota yhteyttä

Hologic tekniseen tukeen ennen käyttöä.

H. Heitä pois liuotettu reagenssi 30 päivän kuluttua tai viimeiseen käyttöpäivään mennessä,

kumpi tahansa tulee ensin.

Taulukko 1: Reagenssin säilytys

Reagenssi/neste Säilytys avaamattomana

Avattu / liuotettu

Stabiilius (viimeiseen

käyttöpäivään asti)

Monistusreagenssit 2 °C–8 °C viimeiseen käyttöpäivään asti 30 päivää, 2 °C–8 °C*

Koetinreagenssit 2 °C–8 °C viimeiseen käyttöpäivään asti 30 päivää, 2 °C–8 °C*

Entsyymireagenssi 2 °C–8 °C viimeiseen käyttöpäivään asti 30 päivää, 2 °C–8 °C*

Target Capture -reagenssit 15 °C–30 °C viimeiseen käyttöpäivään asti 30 päivää, 15 °C–30 °C

Liuos monistusreagenssin

liuotukseen 2 °C–30 °C viimeiseen käyttöpäivään asti E/S (kertakäyttöinen)

Liuos koettimen liuotukseen 2 °C–30 °C viimeiseen käyttöpäivään asti E/S (kertakäyttöinen)

Liuos entsyymin liuotukseen 2 °C–30 °C viimeiseen käyttöpäivään asti E/S (kertakäyttöinen)

Erotusreagenssi 2 °C–30 °C viimeiseen käyttöpäivään asti 30 päivää, 15 °C–30 °C

Kalibraattorit 2 °C–8 °C viimeiseen käyttöpäivään asti E/S (kertakäyttöinen)

Kontrollit 2 °C–8 °C viimeiseen käyttöpäivään asti E/S (kertakäyttöinen)

Öljyreagenssi 15 °C–30 °C viimeiseen käyttöpäivään asti 30 päivää, 15 °C–30 °C

Pesuliuos 15 °C–30 °C viimeiseen käyttöpäivään asti 30 päivää, 15 °C–30 °C

Deaktivointiliuoksen puskuri 15 °C–30 °C viimeiseen käyttöpäivään asti 28 päivää, 15 °C–30 °C

*Voidaan käyttää uudelleen muita määritysajoja varten korkeintaan neljä kertaa, edellyttäen että kokonaisaika

huoneenlämpötilassa ei ylitä 24:ää tuntia.

Progensa PCA3 Säilytys- ja käsittelyohjeet

Progensa PCA3 -määritys 13

501377FI Rev. 003

I. Jäljelle jääneitä avattuja tai liuotettuja reagensseja voidaan käyttää myöhemmissä

määrityksissä, jos ne on säilytetty oikein ensimmäisen käyttökerran jälkeen. Jäljelle jäänyt

reagenssi voidaan yhdistää äsken valmistetun tai toisen jäljelle jääneen reagenssin

kanssa, joilla on sama eränumero. Eri eränumeroilla merkittyihin tarvikesarjoihin

kuuluvia reagensseja ei saa vaihtaa, sekoittaa tai yhdistää keskenään (ks.

Varoitukset ja varotoimet). Yhdistetyn reagenssin mikään komponentti ei saa ylittää

avatun tai liuotetun reagenssin säilytysrajoja. Varmista, että yhdistetty reagenssi on

sekoitettu perusteellisesti ja että on valmistettu riittävä tilavuus, jotta reagenssia riittää

koko määritysajoa varten.

Progensa PCA3 -määritys 14

501377FI Rev. 003

Näytteen kerääminen, kuljetus ja säilytys Progensa PCA3

Näytteen kerääminen, kuljetus ja säilytys

Progensa PCA3 -määritys on suunniteltu kvantifioimaan PCA3- ja PSA-RNA ensivirtsasta,

joka on kerätty TPR:n jälkeen, jossa kumpaakin eturauhaslohkoa sivellään kolme kertaa.

Virtsa prosessoidaan käyttämällä Progensa PCA3 Urine Specimen Transport -tarvikesarjaa.

PCA3- ja PSA-RNA:n stabiilius virtsassa ja prosessoidussa virtsassa määritettiin

tarkkailemalla RNA-kopiomääriä virtsanäytteissä, jotka oli kerätty jäljempänä mainittujen

ohjeiden mukaisesti.

A. Ohjeet virtsanäytteiden keräämiseksi ja prosessoimiseksi:

1. Pyydä potilasta juomaan suuri määrä vettä (noin 0,5 litraa), jotta virtsanäytettä

saadaan riittävä määrä.

2. Suorita TPR alla annettujen ohjeiden mukaisesti välittömästi ennen virtsanäytteen

keräämistä:

Paina eturauhasta niin, että eturauhasen pinta painuu noin 1 cm:n verran, ja etene

kumpaakin lohkoa pitkin tyvestä kärkeen ja sivulta keskelle Kuva 1 mukaisesti. Sivele

kumpaakin lohkoa täsmälleen kolme kertaa. Tämän ei ole tarkoitus olla

eturauhashierontaa.

Kuva 1. Eturauhasen painelun oikea suunta

3. Pyydä TPR:n jälkeen potilasta keräämään ensivirtsa (noin 20–30 ml, kun virtsa alkaa

virrata) asianmukaisesti merkittyyn virtsankeruuastiaan. Tämän on oltava

ensimmäisestä TPR:n jälkeen virtsatusta virtsanäytteestä. Käytä keruuastiaa, jossa ei

ole säilöntäainetta. Jos potilas ei voi lopettaa virtsaamista ja virtsanäytettä on yli 20–

30 ml, käytä koko virtsamäärä. Jos potilas ei pysty virtsaamaan vaadittua määrää,

Progensa PCA3 -määrityksen ajamiseen tarvitaan vähintään 2,5 ml virtsaa. Muuten

näyte on hylättävä.

Huomautus: Hyvin suuret virtsamäärät voivat pienentää PCA3- ja PSA-analyytin

pitoisuuksia ja saattavat joskus harvoin tuottaa epävalidin näytteen. Potilaan olisi siis

pyrittävä välttämään virtsankeruuastian täyttämistä.

4. Prosessoimattomia virtsanäytteitä, joita ei prosessoida välittömästi, on

säilytettävä 2 °C–8 °C:ssa tai jäissä. Jäähdytetty, prosessoimaton virtsanäyte on

siirrettävä virtsanäytteen siirtoputkeen 4 tunnin sisällä näytteenotosta. Muussa

tapauksessa näyte täytyy hylätä ja kerätä uusi näyte. Prosessoimattomia

virtsanäytteitä ei saa pakastaa.

5. Prosessoi virtsanäytteet sulkemalla putken korkki kunnolla ja kääntämällä virtsanäyte

viisi kertaa ylösalaisin solujen suspendoimiseksi. Poista virtsanäytteen siirtoputken

korkki ja siirrä 2,5 ml virtsanäytettä putkeen pakkauksen mukana toimitetulla

kertakäyttöisellä siirtopipetillä. Putkessa on oikea määrä näytettä, kun nestetaso on

virtsanäytteen siirtoputkessa olevan etiketin kahden mustan täyttöviivan välissä.

Left Lobe

Right Lobe

Apex

Base

Vasen

lohko Oikea

lohko

Tyvi

Kärki

Progensa PCA3 Näytteen kerääminen, kuljetus ja säilytys

Progensa PCA3 -määritys 15

501377FI Rev. 003

6. Sulje virtsanäytteen siirtoputken korkki uudestaan tiiviisti ja sekoita virtsanäyte

kääntämällä ylösalaisin 5 kertaa. Tämä on nyt prosessoitu virtsanäyte.

B. Näytteen kuljetus ja säilytys ennen testausta:

1. Prosessoidut virtsanäytteet on kuljetettava laboratorioon virtsanäytteen siirtoputkessa.

Näytteet voidaan lähettää ympäristöoloissa (lämpötilaa ei ole säädetty) tai

pakastettuina. Näytteiden lähetys on järjestettävä siten, että näytteet varmasti

vastaanotetaan testauspaikassa 5 päivän sisällä näytteenotosta.

Lähetyksen vastaanotettuaan laboratorion pitäisi tarkistaa putkeen merkitty

näytteenkeruun päivämäärä. Jos näytteet on lähetetty ympäristöoloissa ja

vastaanotetaan yli 5 vuorokautta näytteenkeruun jälkeen, näyte on hylättävä ja

pyydettävä uusi näyte. Laboratorio voi säilyttää näytteet 2 °C–8 °C:ssa korkeintaan 14

vrk, ennen kuin ne on hävitettävä. Jos tarvitaan pitempiä säilytysaikoja, tarkista eri

lämpötiloissa sallitut säilytysajat Taulukko 2.

Taulukko 2: Prosessoidun virtsanäytteen säilytysajat

2. Prosessoidut virtsanäytteet voidaan pakastaa ja sulattaa enintään 5 kertaa.

C. Näytteiden säilytys testauksen jälkeen:

1. Määritetyt näytteet on säilytettävä pystyasennossa telineessä.

2. Virtsanäytteen siirtoputket, jos niitä ei ole suljettu ehjällä korkilla, on peitettävä

uudella, puhtaalla muovi- tai foliokääreellä.

3. Jos analysoituja näytteitä täytyy jäädyttää tai kuljettaa, poista puhkaistava korkki ja

aseta virtsanäytteiden siirtoputkiin uudet, ei-puhkaistavat korkit. Jos näytteet täytyy

lähettää toiseen laitokseen testausta varten, suositeltuja lämpötiloja on ylläpidettävä.

Vältä roiskahduksia tai ristikontaminaatiota.

Huomautus: Näytteet on kuljetettava soveltuvien kansallisten ja kansainvälisten

kuljetusmääräyksien mukaisesti.

Säilytyslämpötila Aika

Prosessoidun näytteen säilyttäminen ja kuljettaminen: Enintään 5 päivää*

Testipaikkaan tulon jälkeen:

2 °C–8 °C Enintään 14 päivää

-35 °C– -15 °C Enintään 11 kuukautta**

-65 °C tai kylmemmässä Enintään 36 kuukautta**

*Kuljetukseen sallittu aika ympäristöoloissa tai pakastettuna.

**Kylmäsäilytyksen jälkeinen sallittu aika.

Progensa PCA3 -määritys 16

501377FI Rev. 003

Testimenetelmä Progensa PCA3

Testimenetelmä

A. Työalueen valmistelu

1. Säädä yksi vesihaude 62 °C ± 1 °C:n lämpötilaan monistusta edeltäviä toimia varten,

toinen vesihaude 42 °C ± 1 °C:n lämpötilaan monistusta varten ja kolmas vesihaude

62 °C ± 1 °C:n lämpötilaan monistuksen jälkeisiä toimia varten. Varmista, että

vesihauteissa on riittävästi vettä (ks. Toimenpiteeseen liittyviä huomautuksia). Jos

käytät SB100 Dry Heat Bath/Vortexer -laitetta, ks. SB100 Dry Heat Bath/Vortexer -

laitteen sovellutuksen käyttöohjeet Progensa PCA3-määritykselle (SB100-

sovellutuksen käyttöohjeet).

2. Ennen kuin aloitat määrityksen, pyyhi työtasot ja pipettorit 2,5–3,5-prosenttisella

(0,35–0,5 M) natriumhypokloriittiliuoksella. Anna natriumhypokloriittiliuoksen vaikuttaa

tasoihin ja pipettoreihin vähintään 1 minuutin ajan ja huuhtele pinnat sitten vedellä.

Natriumhypokloriittiliuoksen ei saa antaa kuivua. Peitä laboratoriopöytä, jonka päällä

reaktio suoritetaan, puhtailla, muovitaustaisilla ja imukykyisillä laboratoriopöydän

suojapeitteillä.

3. Sijoita riittävä määrä kymmenen kärjen kasetteja Target Capture -järjestelmään (TCS).

Varmista, että TCS-pesupullo on täytetty pesuliuoksella ja imulaite on kytketty

alipainepumppuun. (Ks. Target Capture -järjestelmän käyttäjän opas.)

B. Reagenssin liuotus ja valmistelu

Reagenssin liuotus on suoritettava ennen näytteen siirron aloittamista.

1. Yhdistä pullot, jotka sisältävät lyofilisoituja reagensseja, reagenssia vastaavan

liuoksen kanssa monistus-, entsyymi- ja koetinreagenssien liuottamiseksi. Jos liuoksia

on säilytetty kylmässä, anna niiden palautua huoneenlämpöön ennen käyttöä.

Kuva 2. Liuotusmenetelmä

a. Lisää kuivattuun reagenssiin sen liuottamiseen tarkoitettu liuos. Varmista, että

pullojen etikettien värit täsmäävät sen varmistamiseksi, että ne on yhdistetty

oikein.

b. Avaa kuivattua reagenssia sisältävä ampulli ja työnnä liuotukseen käytettävän

pidikkeen lovettu pää tiiviisti ampullin aukkoon (Kuva 2, vaihe 1).

c. Avaa parina oleva liuotusneste ja aseta korkki puhtaalle, peitetylle työalustalle.

Samalla kun pidät liuospulloa työpöydällä, työnnä liuotukseen käytettävän

pidikkeen toinen pää tiiviisti pullon aukkoon (Kuva 2, vaihe 2).

Progensa PCA3 Testimenetelmä

Progensa PCA3 -määritys 17

501377FI Rev. 003

d. Käännä yhteenliitetyt pullot hitaasti ylösalaisin. Anna liuoksen valua pullosta

lasiampulliin (Kuva 2, vaihe 3). Odota, että lyofilisoitu reagenssi liukenee ja pyöritä

sitten varovasti lasipullossa olevaa liuosta sen sekoittamiseksi. Vältä vaahdon

muodostumista, kun pyörität pulloa (Kuva 2, vaihe 4).

e. Käännä asetelma ylösalaisin ja pidä se 45°:n kulmassa vaahdon muodostumisen

minimoimiseksi (Kuva 2, vaihe 5). Anna kaiken liuoksen valua takaisin

muovipulloon.

f. Irrota liuotukseen käytettävä pidike ja lasiampulli (Kuva 2, vaihe 6).

g. Sulje muovipullo uudestaan korkilla (Kuva 2, vaihe 7). Merkitse kaikkiin liuotettua

reagenssia sisältäviin pulloihin käyttäjän nimikirjaimet ja liuotuksen päivämäärä.

Varmista, että merkitset analyytin (PCA3 tai PSA) koetinreagenssipulloihin.

h. Hävitä liuotukseen käytetty pidike ja lasiampulli (Kuva 2, vaihe 8).

2. Aiemmin liuotettujen koetin-, monistus- ja entsyymireagenssien on saavutettava

huoneenlämpö (15 °C–30 °C) ennen määrityksen aloittamista. Jäljelle jääneiden

reagenssien yhdistäminen, ks. Säilytys- ja käsittelyohjeet. Jos liuotettu

monistusreagenssi sisältää sakkaa, joka ei liukene huoneenlämmössä, lämmitä

62 °C ± 1 °C :n lämpötilassa 1–2 minuutin ajan monistusta edeltävällä alueella. Jos

liuotettu koetinreagenssi sisältää sakkaa, joka ei liukene huoneenlämmössä, lämmitä

62 °C ± 1 °C :n lämpötilassa 1–2 minuutin ajan monistuksen jälkeisellä alueella.

Näiden lämmitysvaiheiden jälkeen liuotettuja reagensseja voidaan käyttää, vaikka

jäljelle olisikin jäänyt hieman sakkaa. Suspendoinnin jälkeen sekoita pullot

kääntämällä niitä varovasti ylösalaisin.

C. Telineen valmistelu

Target capture -vaiheessa, näytteen siirrossa ja monistuksessa käytettävää

toistopipettoria on käytettävä yksinomaan näissä vaiheissa (katso Varoitukset ja

varotoimet).

1. Aseta yksi teline PCA3-analyytille ja toinen teline PSA-analyytille.

Huomautus: Jos näytteiden lukumäärä on tarpeeksi pieni, molemmat analyytit

voidaan testata yhdessä telineessä. Jos käytetään TECAN Freedom EVO 100/4

-laitetta, erilliset telineet on pidettävä yllä kutakin analyyttiä varten. Kerrallaan ei voida

testata kuin korkeintaan kaksi täyttä telinettä (20 TTU:ta).

2. Kymmenen putken yksikön (TTU) telineessä (telineissä), sijoita tarpeeksi TTU-

yksiköitä, jotta niihin mahtuvat kunkin analyytin kalibraattorit, kontrollit ja näytteet.

3. Merkitse TTU:t näytetunnuksilla (sample ID). Taulukko 3 kuvaa kalibraattorien,

kontrollien ja näytteiden lisäyksen. Aloita PSA-kalibraattorit uudella TTU:lla.

Huomautus: Kalibraattorit on ajettava kolmena replikaattina ja kontrollit kahtena

replikaattina, ja ne on ajettava samassa telineessä kuin näytteet. Näytteet on ajettava

duplikaatteina. Älä jätä tyhjiä reaktioputkia kalibraattorien, kontrollien ja näytteiden

väliin. Jos käytät TECAN Freedom EVO 100/4 -laitetta, katso lisäohjeita TECAN

Freedom EVO 100/4 -sovellutuksen käyttöohjeista Progensa PCA3 -määritykselle

(TECAN Freedom EVO -sovellutuksen käyttöohjeet).

Progensa PCA3 -määritys 18

501377FI Rev. 003

Testimenetelmä Progensa PCA3

Taulukko 3: Esimerkki telineen valmistelusta

D. Pitoisuustietojen varmistus

Varmista Progensa PCA3 -määritysohjelman järjestelmänvalvojan kanssa, että

testattavien Progensa PCA3- ja PSA-kalibraattorien ja -kontrollien tarvikesarjojen erien

pitoisuustiedot on syötetty. Lisätietoja, ks. Progensa PCA3 -määrityksen pikaopas

(Pikaopas) tai Progensa PCA3 -määritysohjelmiston järjestelmänvalvojan opas.

Huomautus: Pitoisuustietojen syöttö on välttämätöntä ennen kunkin uuden kalibraattorien

ja kontrollien tarvikesarjan erän ensimmäistä käyttöä. Tämä jälkeiset ajot, joissa

käytetään samasta tarvikesarjan erästä peräisin olevia kalibraattoreita ja kontrolleja, eivät

vaadi enää toimia.

E. Worklist Editorin valmistelu

Tee määrityksen ajon työlista käyttämällä Hologic Worklist Editoria tietokoneella, joka

sijaitsee monistusta edeltävällä alueella. Worklist Editorin käyttö, ks. Pikaopas tai Hologic

Worklist Editorin käyttäjän opas. Jos käytät TECAN Freedom EVO 100/4

-laitetta, ks. jatko-ohjeita myös TECAN Freedom EVO -sovellutuksen käyttöohjeista.

F. Näytteen valmistelu

1. Anna kalibraattorien ja kontrollien lämmetä huoneenlämpötilaan ennen testausta.

Sekoita lasipullot kääntämällä niitä varovasti ylösalaisin.

2. Anna näytteiden lämmetä huoneenlämpötilaan ennen testausta. Näytteitä ei saa

vorteksoida. Näytteet on sekoitettava lämmityksen aikana kääntämällä niitä varovasti

ylösalaisin aika ajoin. Katso osasta Toimenpiteeseen liittyviä huomautuksia sakan

liukenemattomuuteen ja pakastettujen näytteiden käsittelyyn liittyvät tiedot.

Sijainti

telineessä

Näytteen

kuvaus

*PCA3:n

tavoitepitoisuus

(kopioita/ml)

*PSA:n

tavoitepitoisuus

(kopioita/ml)

1–3 Kalibraattori 1 0 0

4–6 Kalibraattori 2 250 7 500

7–9 Kalibraattori 3 2 500 75 000

10–12 Kalibraattori 4 25 000 750 000

13–15 Kalibraattori 5 125 000 3 000 000

16–17 Kontrolli A 1 250 37 500

18–19 Kontrolli B 62 500 1 500 000

20–n Näyte tuntematon tuntematon

*PCA3- ja PSA-positiivisten kalibraattorien ja kontrollien arvot on määritetty, joten kalibraattorien

2–5 ja kontrollien A ja B todelliset kopioita/ml-arvot poikkeavat hieman taulukossa luetelluista

tavoitepitoisuuksista ja vaihtelevat erästä toiseen. Pitoisuustiedot ilmoitetaan kalibraattori- ja

kontrollipullojen pakkaukseen sisältyvässä kortissa ja niitä käytetään kalibraatioon ja ajon

validiteetin määrittämiseen.

Progensa PCA3 Testimenetelmä

Progensa PCA3 -määritys 19

501377FI Rev. 003

G. Monistusta edeltävät toimenpiteet

Monistusta edeltävän ympäristön lämpötilan tulee olla 15 °C–30 °C. Aja molemmat

telineet rinnakkain. Jos käytät SB100 Dry Heat Bath/Vortexer -laitetta, katso SB100-

sovellutuksen käyttöohjeet. Jos käytät TECAN Freedom EVO 100/4 -laitetta, katso

lisäohjeita TECAN Freedom EVO -sovellutuksen käyttöohjeista.

1. Sekoita Target Capture -reagenssi (TCR) perusteellisesti pyörittämällä tai kääntämällä

ylösalaisin. Lisää 100 µl analyyttispesifistä TCR:ää toistopipettorilla sopivaan

reaktioputkeen.

2. Puhkaise kalibraattoripullon korkki mikropipettorilla ja lisää 400 µl kalibraattoria

asianmukaisesti merkittyyn reaktioputkeen. Ota samalla pipetinkärjellä toistettuja

lisäyksiä pullosta puhkaistun korkin kautta. Käytä uusia pipetinkärkiä kullekin

kalibraattorin pullolle. Toista sama kontrollien ja näytteiden lisäyksen kanssa. Peitä ja

säästä mahdollinen jäljelle jäänyt näyte ja säilytä korkeintaan 8 °C:ssa (lisätietoja, ks.

Näytteen kerääminen, kuljetus ja säilytys) sen varalta, että testaus on uusittava.

3. Peitä TTU:t suljentakortilla (suljentakorteilla) ja ravistele telinettä varovasti käsin. Älä

vorteksoi. Inkuboi telinettä 62 °C ± 1 °C :n vesihauteessa 30 ± 5 minuuttia.

4. Poista teline vesihauteesta ja kuivaa putkien pohjat imukykyisellä materiaalilla.

5. Varmista, että suljentakortit ovat lujasti paikallaan. Vaihda tarvittaessa uusiin

suljentakortteihin ja sulje TTU:t tiukasti.

6. Vorteksoi telinettä 60 sekuntia moniputkiyksikön vortex-sekoittimella (ks.

Toimenpiteeseen liittyviä huomautuksia). Aloita vorteksointi 2 minuutin sisällä siitä,

kun olet poistanut telineen vesihauteesta.

7. Älä poista suljentakortteja. Inkuboi telinettä huoneenlämpötilassa 30 ± 5 minuuttia.

8. Sijoita teline Front-kieleke eteenpäin TCS-magneettialustalle 5–10 minuutiksi. Lataa

TTC:t TTC-telineeseen.

9. Esitäytä työntöaseman pumpun letkut pumppaamalla pesuliuosta työntöputkiston läpi.

Pumppaa tarpeeksi nestettä järjestelmän läpi, niin että letkussa ei ole ilmakuplia ja

kaikista kymmenestä suuttimesta tulee tasainen nestevirta.

10. Käynnistä alipainepumppu ja kytke imulaitteen putkisto irti ensimmäisestä liittimestä

imulaitteen putkiston ja loukkupullon välillä. Varmista, että alipainemittari täyttää

vuototestin spesifikaation. Tämän lukeman saaminen voi viedä 15 sekuntia. Kytke

putkisto takaisin ja varmista, että alipainemittari täyttää alipainetason spesifikaation.

Jätä alipainepumppu päälle, kunnes kaikki target capture -vaiheet on suoritettu

loppuun ja imulaitteen putkiston letkut ovat kuivia.

Katso Target Capture -järjestelmän alipainetiedot sisältävää korttia, joka sijaitsee

Target Capture -järjestelmän käyttäjän oppaan loppupuolella tai ota yhteyttä

Hologic tekniseen tukeen lisätietojen saamiseksi.

11. Kiinnitä imulaitteen putkisto lujasti ensimmäiseen kärkisettiin. Laske kärjet

ensimmäiseen TTU:hun niin, että kärjet koskettavat nesteen pintaa. Pidä kärjet

kosketuksessa nesteen pinnan kanssa kärkien liikkuessa alaspäin, kunnes kärjet

koskettavat hetken putkien pohjia. Naputa kärjillä varovasti putkien pohjia, kunnes

kaikki jäljellä oleva neste on poistettu. Älä pidä kärkiä pitkäaikaisessa kosketuksessa

putkien pohjien kanssa tai naputa kärkiä nopeasti, koska alipaineloukkuun voi

muodostua liikaa vaahtoa.

12. Sen jälkeen kun imuvaihe on suoritettu loppuun, työnnä kärjet niiden alkuperäiseen

kärkikasettiin. Toista imuvaiheet muille TTU-yksiköille. Käytä jokaiselle reaktioputkelle

yksinomaan sille omistettua kärkeä.

Progensa PCA3 -määritys 20

501377FI Rev. 003

Testimenetelmä Progensa PCA3

13. Sijoita työntöputkisto kunkin TTU:n yläpuolelle. Käytä työntöaseman pumppua ja jaa

1,0 ml pesuliuosta kuhunkin TTU:n putkeen.

14. Peitä putket suljentakortilla ja poista teline TCS:stä. Vorteksoi kerran moniputkiyksikön

vortex-sekoittimella. Lisätietoja, ks. Toimenpiteeseen liittyviä huomautuksia.

15. Sijoita teline TCS-magneettialustalle 5–10 minuutiksi.

16. Ime kaikki neste kuten osassa Vaiheet 11 ja 12 on kuvattu.

17. Viimeisen imuvaiheen jälkeen poista teline TCS-alustalta ja tutki putket visuaalisesti

sen varmistamiseksi, että kaikki neste on imetty pois ja kaikissa putkissa on

magneettisista partikkeleista koostuva pelletti. Jos nestettä on yhtään jäljellä, sijoita

teline takaisin TCS-alustalle 2 minuutiksi ja toista imuvaihe tälle TTU:lle käyttämällä

samoja kärkiä, joita aikaisemmin käytettiin kunkin reaktioputken kanssa. Putki voidaan

hyväksyä, jos imuvaiheen jälkeen näkyvissä on JONKINLAINEN magneettisista

partikkeleista koostuva pelletti. Näyte on testattava uudelleen mikäli pellettiä ei näy

lainkaan. Jos sama näyte ei sisällä seuraavan ajon tässä vaiheessa

magneettipartikkeleista koostuvaa pellettiä, tämä voi olla merkki näytekohtaisesta

ongelmasta. Tässä tilanteessa suositellaan virtsanäytteen keräämistä uudelleen.

H. Monistus

Huomautus: Entsyymilisäys reaktiotelineeseen (Vaiheet 6 ja 7 jäljempänä) on

suoritettava 90 sekunnin kuluessa.

Suorita Vaiheet 6 ja 7 yhdellä telineellä ennen kuin toistat ne toisella telineellä. Jos käytät

SB100 Dry Heat Bath/Vortexer -laitetta, katso SB100-sovellutuksen käyttöohjeet. Jos

käytät TECAN Freedom EVO 100/4 -laitetta, katso lisäohjeita TECAN Freedom EVO -

sovellutuksen käyttöohjeista.

1. Lisää 75 µl liuotettua, analyyttispesifistä monistusreagenssia toistopipettorilla kuhunkin

reaktioputkeen. Kaikkien telineen reaktioseoksien pitäisi olla nyt väriltään punaisia.

2. Lisää toistopipettorilla 200 µl öljyreagenssia.

3. Peitä putket suljentakortilla ja vorteksoi moniputkiyksikön vortex-sekoittimella.

4. Inkuboi telinettä monistusta edeltävän vaiheen 62 °C ± 1 °C :n vesihauteessa 10 ± 5

minuuttia.

5. Siirrä teline 42 °C ± 1 °C :n vesihauteeseen 5 ± 2 minuutiksi.

6. Pidä teline vesihauteessa ja poista varovasti suljentakortti. Lisää toistopipettorilla 25

µl liuotettua entsyymireagenssia kuhunkin reaktioseokseen. Kaikkien reaktioiden

pitäisi olla nyt oranssin värisiä.

7. Peitä putket heti uudella suljentakortilla. Poista ne vesihauteesta ja sekoita reaktiot

nopeasti ravistelemalla telinettä varovasti käsin.

Huomautus: Pidä telinettä vesihauteen ulkopuolella mahdollisimman lyhyen aikaa,

jotta putket eivät jäähdy.

8. Inkuboi telinettä 42 °C ± 1 °C:n lämpötilassa 60 ± 5 minuutin ajan.

Leht laadib ...

Hologic Progensa PCA3 Assay Kasutusjuhend

Bränd: Hologic

Mudel: Progensa PCA3 Assay

Tüüp: Kasutusjuhend

Laadige alla PDF

aruanne

Hologic Progensa PCA3 Assay Kasutusjuhend

Hologic Progensa PCA3 Assay Kasutusjuhend

Seotud paberid

Muud dokumendid